流式熒光法（ CBA）檢測細胞因子之優勢分析

細胞因子是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質。具有調節固有免疫和適應性免疫、血細胞生成、細胞生長、APSC多能細胞以及損傷組織修復等多種功能。細胞因子可被分為白細胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長因子

細胞因子在體內具有重要的病理指示作用，在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態下，很多細胞因子的表達水平會發生顯著變化。通過對體液中細胞因子濃度的檢測可以對疾病診斷和治療做出相應評價,具有重要的研究及臨床應用價值。由于血清、細胞培養上清、積液中的細胞因子含量低，不容易檢測，加上樣本數量少，傳統的方法無法滿足多細胞因子檢測。如傳統ELISA方法，一次只能檢測一種細胞因子，如果需要檢測10種細胞因子，需要的樣本量ⅹ10，且需要進行多次重復操作，耗費了大量的樣本量和人力成本。

流式編碼微球芯片技術（Cytometric Bead Array， CBA），是用流式細胞儀對多重蛋白進行定量檢測的方法，能夠同時對樣本中的多個指標進行定性、定量檢測，可應用于細胞因子檢測。目前CBA 檢測系統采用聚苯熒光編碼微球（有磁性/非磁性）連結特定的捕獲抗體，捕捉待測物，同時再加入待測物的熒光抗體，三者形成夾心復合物，通過流式細胞儀進行檢測。流式細胞術的優點是同時可以進行多參數檢測，快速并且信息量大，其優勢體現在：

（1）能夠同時對單個樣本進行多種檢測

血清Th1／Th2／Th17 相關細胞因子是實驗中經常會用到的檢測指標，然而實驗室常用的模式動物小鼠的血清量少，很難運用傳統的方法如ELISA法進行多因子檢測，而CBA 法正好能解決這一問題。碧芯生物的Beadstar-mPlexTM系列的多細胞因子檢測試劑盒是基于CBA技術的細胞因子檢測試劑盒，只需要一份樣品，就能同時定量檢測小鼠血清中的10種細胞因子（IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、MCP-1、IFN-γ、TNF-α、IL-12p70、IL-1β），可滿足大多數研究的需求。

（2）所需樣本量少、靈敏度高等

傳統ELISA方法每項實驗樣本用量50-200 μl，基于CBA檢測方法的碧芯生物的Beadstar-mPlexTM多細胞因子檢測試劑盒樣本用量僅需要20 μl，大部分指標的線性范圍在3-2500 pg/mL。對于稀有樣本，即使濃度較低，Beadstar-mPlexTM多細胞因子檢測試劑也可定量同時檢測到多個細胞因子的表達水平。

（3）穩定性好

流式細胞術檢測用于細胞因子檢測是一種高通量、快速、重復性好并能準確定量的方法。能避免酶聯免疫放大技術使信號失真導致的假陽性

（4）檢測流程短，操作簡單。

相比較于ELISA試劑盒的繁瑣操作，CBA操作更為簡單迅速。Beadstar-mPlex^TM系列的產品采用的是磁性熒光編碼微球。通過磁分選作用，將未反應物去除，可省去大量重復離心清洗步驟。

（5）檢測率高（碧芯生物的Beadstar-mPlex^TM多細胞因子*優勢）：由于正常人的血清中細胞因子濃度較低，在實際檢測中，目前大部分基于CBA試劑盒對正常人血清中各細胞因子的檢出率不高，一些血清樣本的熒光值甚至低于對照品濃度為0時的熒光值。結果的準確性不高，究其原因主要是熒光編碼微球對熒光檢測抗體的非特異吸附較強，導致噪音較高（噪音為對照品為0時的檢測熒光值-微球本底檢測熒光值）。當檢測低值血清樣本中，血清中存在復雜的蛋白質體系，不可避免這些蛋白質同樣會與微球產生非特異性吸附，從而與熒光檢測抗體競爭非特異性吸附位點，使最終的熒光檢測值下降。因此減少熒光編碼微球對熒光檢測抗體的非特異性吸附可顯著提升低值血清樣本檢測的準確性。碧芯生物科技（海南省）有限公司通過不斷摸索和優化實驗條件，通過合成一種特殊的三種粒徑不同的微球，再用Avidin修飾微球表面，最終構建了約60種低吸附的熒光編碼微球。與普通的熒光編碼微球相比，這些被特殊的的微球具有對蛋白質低非特異性吸附的特點。因此，用這種包裹好的熒光編碼微球構建的抗原檢測試劑的噪音值明顯降低，可顯著提升靈敏度及低值血清樣本的檢出率